隨著科學技術的不斷發展，醫學技術也在不斷提高。幾年前的冰凍事件照亮了世界。事實證明，不僅食物，而且人體都可以被冷凍和保存。如果你想達到這樣的目標，那么你需要細胞冷卻劑。如何配置這種東西？現在讓我們詳細了解一下細胞冷凍保存液的配方。
(一)細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液;
2. 取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養皿表面)把單層生長的細胞消化下來;
4. 離心1000rpm，5min;
5. 去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml;
6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml;
7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;
8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min;當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
(二) 細胞復蘇
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養液，混勻;
3. 離心， 1000rpm，5min;
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養;
5. 次日更換一次培養液，繼續培養。
注意事項
1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存，但最好為對數生長期細胞。在凍存前一天最好換一次培養液;
2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷;
3、凍存和復蘇最好用新配制的培養液。
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