許多人不知道什么是革蘭氏染色法。這是細胞學中常用的一種差異染色方法。這是一種重新染色的方法。1884年，一位丹麥醫生發明了染色法，分為四個步驟:一次染色、媒染、脫色、再染色等。大多數人不知道革蘭氏染色法的步驟。讓我給你介紹一下革蘭氏染色的步驟

第一，革蘭染色法的步驟是什么？操作步驟：涂片將培養的不同菌分別作涂片(注意涂片切不可過于濃厚)，干燥、固定。固定時通過火焰1一2次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。

.染色( 1 )初染加草酸鉸結晶紫一滴，約一分鐘，水洗。

( 2 )媒染滴加碘液沖去殘水，并覆蓋約一分鐘，水洗。

 3 )脫色將載玻片上面的水甩凈，并襯以白背景，用95 %酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止，約20一30秒鐘，立即用水沖凈酒精。( 4 )復染用番紅液染1一2分鐘，水洗。

( 5 )鏡檢干燥后，置油鏡觀察.革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準，過于密集的細菌，常常呈假陽性。

 6 )同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合制片，作革蘭氏染色對比。革蘭氏染色的關鍵在于嚴格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，菌齡也影響染色結果，如陽性菌培養時間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應。

第二，革蘭氏染色反應是細菌分類和鑒定的重要性狀。它是1884年由丹麥醫師Gr二創立的。革蘭氏染色法(Gram stain )不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類：染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G+表示：染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌，用G一表示。細菌對于革蘭氏染色的不同反應，是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。

革蘭染色法的步驟，革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚糖形成的網狀結構組成的，在染色過程中，當用乙醇處理時，由于脫水而引起網狀結構中的孔徑變小，通透性降低，使結晶紫一碘復合物被保留在細胞內而不易脫色，因此，呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚糖含量低，而脂類物質含量高，當用乙醇處理時，脂類物質溶解，細胞壁的通透性增加，使結晶紫一碘復合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復染液(番紅)的顏色，因此呈現紅色。